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熱敏UDG酶說(shuō)明書

更新時(shí)間:2023-10-24      點(diǎn)擊次數(shù):790

1.png


產(chǎn)品詳情
UDG酶可催化水解DNA中的尿嘧啶堿基與核糖之間的N-糖苷鍵,釋放游離尿嘧啶堿基。本產(chǎn)品來(lái)源于大腸桿菌重組表達(dá)的嗜冷細(xì)菌的ung基因,分子量為 25KDa。本酶催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈 DNA 釋放游離尿嘧啶,對(duì) RNA 無(wú)活性。本酶主要應(yīng)用于防止PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。它的作用原理基于:在 PCR 反應(yīng)中以 dUTP 替代 dTTP 摻入 DNA 中,形成含 dU 堿基的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物,UDG 能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA dU 堿基的糖苷鍵,降解 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物,消除上輪擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)新樣本的污染問(wèn)題。
特點(diǎn)

?  25-37度范圍內(nèi)活性高,避免了ji端熱敏UDG常溫失活的缺陷;

?  本酶在60℃下熱處理10分鐘,完quan不可逆失活;

?  本酶的反應(yīng)體系與Taq DNA聚合酶buffer相同,保證了活性體系的一致性。

濃度
1U/μl
活性定義
37反應(yīng)條件下,每分鐘催化 60 pmole尿嘧啶堿基從含尿嘧啶的雙鏈 DNA 上釋放所需要的酶量 1 U
活性測(cè)定條件
10 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 20 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4, 0.01% Tween 20, 1.5 mM MgCl2 中,37℃ 溫育。
酶貯存緩沖液
20mM Tris-HCl (pH 7.5), 100mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 0.05% Tween 20, 50% glycerol
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

Component

78DC10123-200U

78DC10123-1000U

熱敏UDG

200U

1000U

10×UDG Buffer

0.4 ml×1

1.0 ml×1

運(yùn)輸與保存
-20℃保存  藍(lán)冰運(yùn)輸
適用范圍
主要應(yīng)用于防止PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。作用原理基于:在 PCR 反應(yīng)中以 dUTP 替代 dTTP 摻入 DNA 中,形成了含 dU 堿基的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物,UDG能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA U 堿基的糖苷鍵,降解 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物,消除上輪擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)新樣本的污染問(wèn)題。
應(yīng)用舉例

防止PCR產(chǎn)物污染的使用方法

1. 按如下表格配制PCR反應(yīng)液

PCR組份

體積/μl

終濃度

10×Taq Buffer

5

dNTPs2.0 mM

5

0.2 mM

dUTP2.0 mM

1-5

0.04-0.2 mM

引物F10 μM

1.5

0.3 μM

引物R10 μM

1.5

0.3 μM

Template

1-5

/

熱啟動(dòng)Taq聚合酶(2.5U/μl

1.0

2.5U

熱敏UDG1U/μl

1.0

1U

ddH2O

Varable

/

總體積

50

/







2. 37℃下反應(yīng)10分鐘。

3. 在95下熱失活UDG 2分鐘(此步驟可省略,直接進(jìn)行PCR,預(yù)變性步驟會(huì)失活UDG)。

4. PCR反應(yīng)。

質(zhì)量控制

無(wú)內(nèi)切酶活性:50 U的本酶和1 μg的pBR322 DNA在37℃下反應(yīng)2小時(shí),DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。


品名
貨號(hào)規(guī)格品牌
熱敏UDG酶78DC10123-200U200UBIOHUB
熱敏UDG酶78DC10123-1000U1000UBIOHUB







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