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線性聚乙烯亞胺PEI MW25000

簡要描述:BIOHUB 線性聚乙烯亞胺PEI MW25000 轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產品,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于AAV,LV和重組蛋白等工業化生產。

聚乙烯亞胺是一種具有較高陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔兩個碳原子,即每第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿"體(proton sponge)

  • 產品型號:
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2024-07-17
  • 訪  問  量:4117

詳細介紹

品牌BIOHUB供貨周期一個月
應用領域生物產業

基本信息CAS:9002-98-6

分子式:(CH2CH2NH)n

分子量:25,000

熔點:73-75℃

溶解性:溶于熱水,低pH值的冷水,甲醇和乙醇;

不溶于:苯、、yi醚、丙酮

形式:白色固體

生物毒性:未知

安全防護:手套及口罩

存儲:PEI 內含自由氨基,建議開封后 4℃干燥保存,減緩氧化過程。

效期:3年 

運輸:常溫

特點大量實驗數據反饋細胞通用性好,有非常好的轉染效果,尤其對293,CHO細胞系有特別顯著的轉染效果。

配置方法

 

 

轉染操作流程:(貼壁細胞轉染方法)

    1. 接種細胞: 轉染前一天,用膠原酶(BIOHUB Cat#78CL10002)消化細 胞并計數。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置 入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

    2. 準備 DNA-PEI 復合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升 至室溫。依據表 1 所示,用 Opti-MEM ITM或其他適合的無蛋白培 養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線 性 PEI 轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批 DNA 比例可 能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性 PEI 轉染 試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI 復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

    3. 轉染細胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI 復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在 無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴 DNA-PEI 復合 物。轉染 3 h 后,添加½體積的包含 30%血清的生長培養基。

    4. 孵育細胞和分析結果: 在 CO2 培養箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染 后最快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。

    5. 轉染 24 h 后,將細胞傳代至新鮮的生長培養基中(將細胞稀釋 10 倍 以上),在 CO2 培養箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆,在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。

 

轉染操作流程:(懸浮細胞轉染方法)

 

    1. 轉染前準備:懸浮細胞傳代接種于適量含懸浮細胞生長培養基中,合適條件下培養。根據培養瓶大小調整細胞密度(例100mL培養瓶,1X10 6 cells/mL),然后旋緊瓶口放入搖床繼續培養,2~4小時后可以進行轉染。

 

    2. 準備 DNA-PEI 復合物:DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

 

    3. 轉染細胞:PEI-DNA轉染復合物逐滴加入到細胞培養液中,搖勻后旋緊瓶口放回搖床合適培養條件下培養至可以分析檢測

 

    4. 孵育細胞和分析結果:轉染后一般24-72h即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。

 

    5. 如果要獲得更多的蛋白產量,有文獻表明轉染后24小時,可以適當稀釋細胞,稀釋比例參考范圍(1:11:5之間,可以增加蛋白產量,稀釋效應與最佳稀釋比率應根據經驗確定


產品背景

     BIOHUB 生產的78Bio PEI是一種優化的線性陽離子聚合物轉染試劑,分子量分別為 25000 和 40000,78BioPEI40000 相比 25000 轉染效率高,但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達系統中,相比于市面上的脂質體 78BioPEI 都表現出高的蛋白表達量(無 論是 96 孔板還是 100L 的細胞反應器),以及更小的細胞毒性、更高的轉染效和更高的可 重復性,并且十分經濟的高性價比轉染試劑。產品具有以下特點:

1.轉染效率高,細胞毒性低;  蛋白表達量高;

2.節約成本:BIOHUB 78 PEI轉染試劑 ,進口品質,親民價格,至少能夠降 40% 的轉染試劑總成本;

3.適用于 HEK293 等真核細胞的轉染;

4.適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉染;

5.適用于有血清和無血清的轉染條件;

6. 無機試劑,無動物源成分;

7. 產品穩定,質控嚴格;

8. 工藝流程適用范圍廣,容易優化 適合小規模培養板,培養瓶到大規模的生物反應器。

注意事項

  1. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

  2. 本產品主要用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

  3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當然酸可能不用加那么多,詳細用量可試加一點 ,攪拌看看,足夠溶解就行,不一定需要加到 pH 那么低。 

  4.一定要溶解充分,溶解不充分會影響后續的轉染效率.

  5.冷凍后可能會影響其后續轉染效果。

 

 

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