無(wú)機(jī)焦磷酸酶 （0.1 U/μL）說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品描述

本制品為利用大腸桿菌大規(guī)模發(fā)酵表達(dá)的 重組無(wú)機(jī)焦磷酸酶（酵母來(lái)源），可催化無(wú)機(jī)焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽：P2O7 4- +H2O+PPase→2HPO4 2- 。這是一個(gè)高放能的反應(yīng)，自然條件下，無(wú)機(jī)焦磷酸酶可以為蛋白、RNA和DNA的生物合成反應(yīng)提供熱力學(xué)動(dòng)力，并在脂代謝，鈣吸收以及骨形成等生物轉(zhuǎn)化過(guò)程中發(fā)揮作用。該酶在實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中能夠高效發(fā)揮作用，保證反應(yīng)的進(jìn)行。在分子生物學(xué)中可用于反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中提高RNA產(chǎn)量。

來(lái)源：重組E.Coli

分子量：63 kDa

純度：≥95%

比活：0.1 U/μL

比活單位定義：標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下每分鐘催化無(wú)機(jī)焦磷酸鹽生成 1 μmol 磷酸鹽所需的酶量定義為 1 個(gè)活性單位

存儲(chǔ)緩沖液：20 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% 甘油， pH 8.0

質(zhì)量保證

1. SDS-PAGE膠檢測(cè)僅可見(jiàn)清晰單一的目的條帶；

2. 酶動(dòng)力學(xué)實(shí)時(shí)熒光法顯示無(wú)RNA酶污染。

產(chǎn)品性質(zhì)1. 無(wú)機(jī)焦磷酸酶是一種金屬蛋白酶，達(dá)到最大活性需要 Mg 2+ 的參與；2. 熱穩(wěn)定性：最佳反應(yīng)溫度為 25 ℃，65 ℃ 10min 可使該酶失活；3. 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中提高RNA產(chǎn)量；4. 增強(qiáng)DNA復(fù)制能力。產(chǎn)品組分

產(chǎn)品應(yīng)用1. 優(yōu)化 RNA 轉(zhuǎn)錄：提高體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的 RNA 產(chǎn)量；2. 優(yōu)化 PCR 反應(yīng)：提高效率，增加 DNA 產(chǎn)量；3. 去除利用焦磷酸鹽測(cè)定法來(lái)進(jìn)行 SNP 基因分型的試劑中的 PPi 污染物；4. 促進(jìn)蛋白質(zhì)、RNA 和 DNA 的合成；5. 催化 PPi + H2O→2Pi 的反應(yīng)；6. 作為反應(yīng)緩沖液的組分用于氨酰化的測(cè)定，以對(duì)摻入tRNA的[3H]L-甲硫氨酸進(jìn)行定量。運(yùn)輸和保存方法

干冰運(yùn)輸。-20℃保存，有效期一年。推薦分裝保存，避免反復(fù)凍融。

應(yīng)用實(shí)例1. 在RNase free的離心管中加入右側(cè)表格中各組分配制反應(yīng)體系；2. 將上述反應(yīng)液混合均勻，低速離心至管底，37 ℃孵育4個(gè)小時(shí)。若轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度小于100 nt，增加反應(yīng)時(shí)間至4-8個(gè)小時(shí)；3. 轉(zhuǎn)錄后取樣品進(jìn)行凝膠電泳，取樣1 μL稀釋到5 μL，然后用1%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行檢測(cè)，以確定轉(zhuǎn)錄是否成功；4. 反應(yīng)完成后，加入DNase Ⅰ（RNase free），37 ℃孵育30 min以去除模板DNA。 注：（1）為了特定區(qū)域的有效轉(zhuǎn)錄，建議在其區(qū)域下游把模板DNA預(yù)先切成平端或5′突出末端。（2）反應(yīng)體系于室溫配置。由于10×Transcription Buffer 中含有亞精胺，低溫下亞精胺濃度過(guò)高容易引起DNA模板沉淀，建議最后加入模板DNA。（3）建議在PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)，為防止蒸發(fā)，建議開(kāi)啟熱蓋功能。（4）使用試劑、容器等無(wú)RNA酶污染。注意事項(xiàng)1、使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20 ℃保存；2、該酶在多種反應(yīng) Buffer 中均具有活性，通常該酶在 HDA、LAMP 等實(shí)驗(yàn)中，直接加入即可；3、該酶的用量在不同的實(shí)驗(yàn)中需要優(yōu)化，通常在 0.05~1 U/ml 濃度調(diào)整；4、該酶的最佳反應(yīng)溫度為 25 ℃，其在 16~37℃均有活性，65 ℃ 10min 可使該酶失活；5、輔因子：Mg2+對(duì)于酶發(fā)揮活性是必須的。6、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。7、本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。